Så rekonstituerar du lyofiliserade peptider: en laboratorieguide

Lyofiliserade peptider kommer som ett lätt pulver i förseglade vialer. Innan de kan användas i cellodling, bindningsanalyser eller andra in vitro-modeller måste de rekonstitueras i ett lämpligt utspädningsmedel. Noggrant arbete bevarar peptidintegriteten och gör efterföljande mätning mer tillförlitlig.

Innan du börjar

• Låt vialen nå rumstemperatur om den var kyld eller fryst.
• Inspektera den lyofiliserade kakan med avseende på fuktinträngning eller skada på tätningen.
• Förbered bakteriostatiskt vatten (0,9 % bensylalkohol) eller sterilt vatten som krävs av din SOP.
• Använd insulinsprutor eller precisionspipetter kalibrerade för små volymer.
• Arbeta i ett rent område; handskar och ytor med låg partikelhalt minskar risken för kontaminering.

Tillsätt spädningsmedel utan att skada peptiden

Rikta spädningsvätskan långsamt ner genom vialens innervägg – inte på själva det lyofiliserade materialet. Höghastighetsströmmar kan orsaka skumbildning och mekanisk stress på peptidmatrisen. Efter att ha tillsatt den beräknade volymen, snurra eller rulla vialen försiktigt. Undvik kraftig skakning om inte ditt protokoll specifikt kräver det.

Beräknar volym

Slutkoncentrationen beror på hur mycket spädningsmedel du tillsätter i förhållande till peptidmassan i vialen. En 10 mg vial rekonstituerad med 2 ml bakteriostatiskt vatten ger 5 mg/ml. Använd vår peptidkalkylator för att planera uttagsvolymer och injektionsenheter innan du börjar.

Efter rekonstitution

• Låt lösningen lösas upp helt - de flesta peptider klarnar inom några minuter.
• Märk vialen med datum, koncentration och batchnummer.
• Förvaras enligt föreningsspecifika stabilitetsdata (ofta 2–8 °C kortvarigt).
• Alikvoter om du vill frysa upprepade gånger - tina; varje cykel kan minska aktiviteten.

Endast för forskning. Följ institutionell SOP och leverantörs COA för föreningsspecifik hantering.